今早，我公司吳收到由沈陽農業大學朱老師發來的會話。朱老師在2015年連續購買了6次ELISA試劑盒，上周，朱老師我司技術說想要試試自己配的試劑盒，看看檢測效果。在朱老師給吳的會話中表示：“我的這個檢測結果不理想，不知道是哪里出了問題。幫我看下是什么原因可以嗎？”我公司試劑盒售后客服吳說可以，并為朱老師安排技術解析Elisa試劑盒測定結果。

    朱老師的主要問題是：我自己合成8個氨基酸的抗原短肽，和BSA耦連后免疫動物，1個月后用ELISA測定血清中針對抗原短肽的抗體滴度，具體步驟：用碳酸緩沖液溶解抗原短肽后包板，4度冰箱18小時，再用1%OVA37度封閉2小時，洗板3次。待測血清用10%小牛血清倍比稀釋，37度溫育1小時，洗板3次，加入二抗，37度溫育40分鐘，洗板3次，加TMB顯色，結果比較詭異，陰性對照也顯色了，且OD值和陽性差別不大。是什么原因呢？是洗板的問題嗎？ 

    十分鐘后，技術員給朱老師去解答。可以根據這幾個方面分析： 

1.洗板是否串孔，如串孔的話可能造成污染;你一抗、二抗每次洗板時洗5遍以上。

2.封閉液的問題，你說陰性對照也顯色了，那主要的問題應該是封閉，應重新考慮用OVA封閉是否適合，如果OVA封閉效果不好的話可以選擇其他的封閉液。封閉液的選擇園子里有很多相關的帖，你搜一下看看。

3.建議ELISA試劑盒包被在37度兩小時，這樣的效果可能會好一些。

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